Trans Plus 細胞轉(zhuǎn)染試劑

制膠 蛋白質(zhì)生物學 試劑

• 價格￥690
• 規(guī)格1ml
• 貨號HKR063
• 單位支
• 品牌HaoKebio

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【產(chǎn)品信息】

【產(chǎn)品簡介】

Trans Plus 細胞轉(zhuǎn)染試劑，作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的聚合物與核酸分子的帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后，與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進入細胞。

本產(chǎn)品經(jīng)過本公司的優(yōu)化處理，具有轉(zhuǎn)染效率高，細胞毒性低，操作簡單，重復性好，適用范圍廣等特點?

【儲存與運輸】

藍冰運輸， 4℃保存，有效期一年。（不可冰凍）

【使用方法】
使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請參考表 1）

1． 接種細胞

對于貼壁細胞，轉(zhuǎn)染前 18-24 h 進行鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuǎn)染時的密度大約在 80%左右。對于懸浮細胞，轉(zhuǎn)染當天，在配制 Trans-DNA 復合物之前進行鋪板，每 500 μL 生長培養(yǎng)基中加入 4~8×105cells。

【注】：培養(yǎng)液中的血清不影響轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設(shè)置梯度進行優(yōu)化最佳使用量。

2．準備 Trans-DNA 復合物

(1) 對于每孔細胞，將 1 μg 質(zhì)粒 DNA 稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基（或OPTI-MEM I 培養(yǎng)基），混勻。

(2) 對于每孔細胞，將 3 μL Trans 轉(zhuǎn)染試劑稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基（或者 OPTI-MEM I 培養(yǎng)基），輕輕混勻。

【注】：無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基是稀釋液，不能使用含血清的培養(yǎng)基進行 DNA 和 Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因為 Trans-DNA 轉(zhuǎn)染復合物的形成過程不能含有血清。

(3) 將稀釋好的 Trans 轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒 DNA 中，輕輕混勻。

【注】：此混合的順序不能反向進行。

3．轉(zhuǎn)染細胞

(1) 將上述 80 μL Trans-DNA 轉(zhuǎn)染復合物均勻滴入到含細胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微振蕩，讓 Trans-DNA 復合物分散均勻。

(2) 在 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 6-18 h，去除含 Trans-DNA 復合物的培養(yǎng)液，更換新的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至對轉(zhuǎn)入基因表達分析。

【注意事項】

1. 本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2. 質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高純度無內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒。通過 260 nm 光吸收測定 DNA 濃度，260nm / 280 nm 比值確定 DNA 純度（比值應該在 1.8～2.0 的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。

3. 細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保細胞沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用李記生物的胎牛血清（貨號：AC03L055）培養(yǎng)細胞。

4. 細胞培養(yǎng)液要求： Trans 細胞轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染，并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是，制備轉(zhuǎn)染復合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋 DNA 和轉(zhuǎn)染試劑，因為血清會影響復合物的形成。確保細胞培養(yǎng)液沒有被細菌、真菌或支原體污染。轉(zhuǎn)染時培養(yǎng)液中不添加抗生素。

5. 試劑用量的優(yōu)化：DNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，初次使用應優(yōu)化 DNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA 使用 1～4 μL 體積 Trans 細胞轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。DNA 和轉(zhuǎn)染試劑的比例，通常推薦是 1:2~1:5。

表 1：不同培養(yǎng)體積對應的待轉(zhuǎn) RNA、 Trans、稀釋液用量

使用時 DNA（μg）: Trans 細胞轉(zhuǎn)染試劑（μL）比值保持在 1:2~1:5。