【產(chǎn)品信息】
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| 熒光掃描（四標(biāo)） | HKF4019 | 張 | 300元 |
石蠟切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、實(shí)驗(yàn)器材及試劑
- 實(shí)驗(yàn)器材
| 名稱 | 廠家 | 型號(hào) |
| 脫水機(jī) | 湖北貝諾醫(yī)療科技有限公司 | JT-12S |
| 生物組織自動(dòng)包埋機(jī) | 湖北貝諾醫(yī)療科技有限公司 | JB-L5 |
| 轉(zhuǎn)輪式切片機(jī) | 徠卡顯微系統(tǒng)上海有限公司 | HistoCoreBIOCUT |
| 石蠟包埋機(jī)（冷臺(tái)） | 湖北貝諾醫(yī)療科技有限公司 | JB-L5 |
| KD-P組織攤片機(jī) | 浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司 | 51A011 |
| 烤箱 | 天津市萊玻特瑞儀器設(shè)備有限公司 | GFL125 |
| 載玻片及蓋玻片 | 江蘇匯達(dá)醫(yī)療器械有限公司 | 710510 |
| 微波爐 | 美的 | M1-L213B |
| 脫色搖床 | 上海琪特分析儀器有限公司 | STS-3 |
| 渦旋儀 | 秒生科技有限公司 | SI-A256 |
| 移液槍 | Dragon | KE003068 |
| 組化筆 | Gene tech | GT1001 |
| 熒光顯微鏡 | NIKON | ECLIPSE C1 |
| 試劑 | 廠家 | 貨號(hào) |
| 無水乙醇 | 杭州宏達(dá)化工儀器有限公司 | SJ003614 |
| 二甲苯 | 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 | 10023418 |
| 20xTRIS-EDTA修復(fù)液（PH8.0） | 杭州浩克生物技術(shù)有限公司 | HKI0003 |
| PBS緩沖液 | 杭州浩克生物技術(shù)有限公司 | |
| BSA | 杭州浩克生物技術(shù)有限公司 | HK5021 |
| 一抗：xxx綠 | | |
| 二抗：HRP超敏山羊抗兔鼠通用二抗 | 杭州浩克生物技術(shù)有限公司 | HKI0029 |
| Flare520綠 | 杭州浩克生物技術(shù)有限公司 | HKI0014 |
| DAPI（即用型） | 杭州浩克生物技術(shù)有限公司 | HKI0005 |
| 抗熒光淬滅封片劑 | 杭州浩克生物技術(shù)有限公司 | HKI0007-1 |
- 石蠟切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟
- 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-無水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min-85%酒精6min-蒸餾水洗。
- 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA修復(fù)液（PH8.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，中火8min?；?min中低火7min，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
- 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：切片加上3%的雙氧水，室溫孵育25min，將玻片置PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
- 血清封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在組化圈內(nèi)滴加3%BSA 均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。
- 加一抗：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加按一定比例稀的抗體覆蓋組織。切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。
- 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。
- 信號(hào)放大:將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min 。滴加相對(duì)應(yīng)顏色Flare信號(hào)放大試劑，3-5min.將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min 。
- DAPI復(fù)染細(xì)胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。
- 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
- 鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像，根據(jù)對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)選擇相應(yīng)通道。
| Flare染料 | 激發(fā)波長(zhǎng) | 發(fā)射波長(zhǎng) |
| DAPI 藍(lán)色 | 350 | 420 |
| Flare480青綠 | 450 | 480 |
| Flare520綠 | 490 | 520 |
| Flare570紅 | 550 | 570 |
| Flare620橙 | 590 | 620 |
| Flare690粉 | 630 | 690 |
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