穩(wěn)轉(zhuǎn)珠構(gòu)建
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查看全文實(shí)驗(yàn)流程:
試劑盒:以實(shí)際試劑盒品牌為準(zhǔn)
實(shí)驗(yàn)流程(具體步驟以說(shuō)明書為準(zhǔn)):
1.樣本準(zhǔn)備:血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清;
2.操作步驟:處理樣本配制標(biāo)準(zhǔn)品—加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)—洗板,加檢測(cè)抗體溶液,孵育—洗板,加酶溶液,孵育— 洗板,加TMB底物— 加終止液50ul,立即450nm讀數(shù)(雙抗夾心法)
處理樣本配制標(biāo)準(zhǔn)品—加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)—加檢測(cè)抗體-加酶溶液— 混勻孵育— 洗板,加TMB顯色— 加終止液50ul,立即450nm讀數(shù)(競(jìng)爭(zhēng)法)
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:有樣本OD值代入標(biāo)曲中計(jì)算出濃度,結(jié)果以EXCEL形式發(fā)出。
送樣運(yùn)輸要求:
1、動(dòng)植物組織樣本(干冰運(yùn)輸)
準(zhǔn)確稱取動(dòng)物組織重量按重量(mg):體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水),冰水浴條件下,機(jī)械勻漿,制備成10%的勻漿液,2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘,離心10分鐘,取上清液進(jìn)行測(cè)定。
2、血清樣本(干冰運(yùn)輸)
全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜(GLU檢測(cè)請(qǐng)勿全血樣本放置過(guò)夜取血清)后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min,取上清即可立即檢測(cè);或進(jìn)行分裝,并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心,然后檢測(cè)。
3、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)
可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min,取上清即可立即檢測(cè);或進(jìn)行分裝,并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心,然后檢測(cè)。
4、細(xì)胞樣本
貼壁細(xì)胞:將細(xì)胞用PBS沖洗2次后,用細(xì)胞刮將細(xì)胞小心刮下來(lái),將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分,離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀,干冰運(yùn)輸。
懸浮細(xì)胞:將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分,離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀,干冰運(yùn)輸。
細(xì)胞上清:標(biāo)本于2-8℃,3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清,上清立即用于實(shí)驗(yàn),或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。
僅供科研用途,不可用于臨床診斷!
服務(wù)介紹: 構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株的基本原理是將外源DNA克隆到具有某種抗性(最常用的有新霉素(Neomycin)、殺稻瘟菌素(Blasticidin)、嘌呤霉素(Pur...
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